Estudo analítico aplicado à determinação de impurezas nitrosaminas em matéria-prima medicamentosa losartana

Abstract

Em julho de 2018, análises agências regulatórias revelaram a presença potencial de contaminantes genotóxicos chamados nitrosaminas (NAs) em Antagonistas do Receptor de Angiotensina II (ARAs). O presente trabalho avaliou as técnicas ATRFTMIR e FTMIR em pastilha para análise qualitativa e quantitativa de NAs: Nitrosodimetilamina (NDMA), Nitrosodietilamina (NDEA), Nitrosodiisopropilamina (NDIPA) e NitrosodiButilamina (NDBA). Além disso, desenvolver e validar método LCMS/MS para NDEA, NDIPA e NDBA; elaborar manuscrito abordando aspectos regulatórios, toxicológicos e analíticos. Estudar a degradação da losartana em diferentes condições e, conduzir a avaliação in silico com Zeneth e Spartan. A perspectiva do desenvolvimento de método espectroscópico na faixa infravermelho médio empregando duas metodologias, a clássica metodologia de KBr em pastilha ou disco e a metodologia alternativa chamada ATR (do inglês Attenuated Total Reflectance), posteriormente comparar os limites quantificação (LQ) e limites de detecção (LD) alcançado o LQ e o LQ in ppm (ηg mg-1 ) para ambos: metodologia FTMIR KBr-pellets (NDBA 1,44x10-3 e 4,81x10-3 )%; (NDEA 8,78x10-4 e 2,93x10-3 1,2x10-5 )%; (NDIPA 1,11x10-3 e 3,70x10-3 )%; (NDMA 4,94x10-4 e 1,65x10-3 )%; e para a metodologia ATR-FTMIR foram (NDBA 5,52x10-6 1,83x10-5 )%; (NDEA 2,01x10-5 6,69x10-5 )%; (NDIPA 1,07x10-5 e 3,58x10-5 )%; (NDMA 3,05x10-5 e 1,02x10-4 )%. Os limites máximos propostos pelas agências reguladoras para uma dose diária de 50 mg de losartana são os seguintes: (NDBA, 1,2x10-5 ; NDEA, 1,2x10-5 ; NDIPA, 1,2x10- 5 e NDMA, 9,6x10 -5 )%. Os resultados obtidos com ambas as metodologias são aproximadamente 10 a 100 vezes superiores aos limites regulatórios. A seguir foi conduzida uma ampla revisão sobre a presença de NAs em medicamentos juntamente com os métodos analíticos de identificação e determinação. O estudo utilizou LCMS/MS para determinar simultaneamente três NAs no modo de ionização API losartana potássica, usando uma fonte APCI em modo positivo e um método de (MRM), seguindo as diretrizes do ICH Q2(R1). A linearidade com (R2) > 0,999 na faixa de 0.5–50 ng mL-1 . Os limites de quantificação e limite de detecção foram 0,42 e 1,27 ng mL-1 para NDBA, 1,7 e 3,2 ng mL-1 para DIPNA, 1,96 e 5,95 ng mL-1 para NDEA. A exatidão do método proposto com média de recuperação de 99,44% para NDBA; 101,70 para DIPNA 100, 74 % para NDEA. A precisão do método apresentou desvio padrão relativo de 6,68%; 5,40% e 4,99% para NDBA, DIPNA e NDEA, respectivamente. Outros parâmetros de validação como incluindo: especificidade estabilidade, e robustez de acordo com os critérios de validação de métodos. A influência estudo da estabilidade da losartana na presença de NDMA, NDEA, NDIPA e NDBA foi avaliada nas condições de hidrólise ácida, hidrólise básica, termodegradação, peroxidação e fotodegradação UVA da losartana na presença de NDMA, NDEA, NDIPA e NDBA. O Zeneth foi utilizado com a finalidade de predizer rotas de degradação e prever produtos de degradação nas distintas condições. Além disso, o Software Spartan foi empregado para medir a reatividade das NAs. Com os dados obtidos pelo Zeneth, foi possível comparar produtos de degradação encontrados por LC-MS/MS, a partir disso, traçar vias de degradação. Os resultados obtidos mediram as respectivas reatividades das nitrosaminas e foram comparados tanto com os obtidos por HPLC/DAD quanto LC-MS/MS.

In July 2018, regulatory agencies revealed the potential presence of genotoxic contaminants known as nitrosamines (NAs) in angiotensin II receptor blockers (ARBs) .The current study aims to evaluate the ATR -FTMIR and FTMIR techniques for the qualitative and quantitative analysis of NAs NAs: Nitrosodimethylamine (NDMA), Nitrosodiethylamine (NDEA), Nitrosodiisopropylamine (NDIPA) and NitrosodiButylamine (NDBA). Additionally, we aim to develop and validate an LCMS/MS method for detecting NDEA, NDIPA, and NDBA. A manuscript will be prepared to address regulatory, toxicological, and analytical aspects. Furthermore, we will examine the manipulation of losartan under various conditions and conduct in silico evaluations using Zeneth and Spartan. The LQ and LQ achieved for both: FTMIR KBrpellets methodology (NDBA 1.44x10-3 and 4.81x10-3 )%; (NDEA 8.78x10-4 and 2.93 x10-3 and 1.2 x10-5 )%; (NDIPA 1.11x10-3 and 3.70 x10-3 ) %; (NDMA 4.94 x10-4 1.65 x10-3 ) %; and for ATR-FTMIR methodology were (NDBA 5.52x10-6 and 1.83x10-5 )%; (NDEA 2.01x10-5 and 6.69x10 -5 )%; (NDIPA 1.07x10-5 and 3.58 x10-5 )%; (NDMA 3.05x10-5 and 1.02x10-4 )% respectively .The maximum limits proposed by regulatory agencies for a daily dose of 50 mg of losartan are as follows: (NDBA is 1.2 x10-5 ; NDEA, 1.2 x10-5 ; NDIPA , 1.2 x10-5 and NDMA, 9.6 x10-5 )%. The results obtained from both methodologies are approximately 10 to 100 times higher than the regulatory limits. The study performed LC-MS/MS to simultaneously determine three NAs (NDBA, DIPNA and NDEA in the API losartan potassium ionization mode, using an APCI source and a (MRM) method, following ICH Q2(R1) guidelines. Linearity with (R2) > 0.999 in the range of 0.5–50 ng mL-1. The limits of quantification and limit of detection were 0.42 and 1.27 ng mL-1 for NDBA, 1.7 and 3.2 ng mL -1 for DIPNA, 1.96 and 5.95 ng mL-1 for NDEA. The accuracy of the proposed method with average recovery of 99.44% for NDBA, 101.70 for DIPNA 100, 74% for NDEA. The accuracy of the method presented a relative standard deviation of 6.68%; 5.40% and 4.99% for NDBA, DIPNA and NDEA, respectively. Other validation parameters include: specificity, stability and robustness according to method validation criteria. A study on the stability-indicating of losartan in the presence of NDMA, NDEA, NDIPA and NDBA was evaluated under various conditions, such as acid hydrolysis, hydrolysis, basic thermodegradation, peroxidation, and UVA photodegradation. The Zeneth software was used to predict the processing routes and products of losartan when exposed to these NAs under distinct conditions. Spartan Software was also used to assess the reactivity of the NAs. Using Zeneth data, researchers were able to compare the processing products identified via LC-MS/MS, allowing for easier tracing of the processing routes. The results measured the nitrosamines' reactivities and were compared to findings obtained using both HPLC/DAD and LC-MS/MS techniques.