Ação antioxidante da melatonina na criopreservação de tecido ovariano, sêmen e embriões de zebrafish

Abstract

O objetivo deste estudo foi avaliar a influência do potencial antioxidante da metoxi-N-acetiltriptamina ou também conhecida por melatonina, em sêmen e fragmentos de tecido ovariano de zebrafish criopreservados, e em embriões resfriados de zebrafish. O sêmen de zebrafish foi criopreservardo, com diferentes concentrações de melatonina 0 M, 10-11M, 10-9 M e 10-7 M, e posteriormente foram realizados testes bioquímicos nesses tecidos criopreservados. O tecido ovariano foi criopreservado com diferentes concentrações de melatonina 0 M, 10-11M, 10-9 M e 10-7 M, e posteriormente foram realizados testes bioquímicos nesses tecidos criopreservados. Também foi avaliado a influência das concentrações de 0 M, 10-11M, 10-9 M e 10-7 M de melatonina, sobre a taxa de sobrevivência e taxa de eclosão em embriões resfriados de zebrafish. Para o sêmen foram realizados os testes de análises bioquímicas: quantificação proteica, peroxidação lipídica, avaliação da atividade enzimática Superóxido Dismutase (SOD), avaliação da atividade da enzima Catalase (CAT), avaliação da atividade da gluatationa S-transferase (GST), além do teste de Ensaio de Cometa. Para o tecido ovariano foram realizados o teste de integridade de membrana, e os testes para estresse oxidativo: ensaio de diacetato de Diclorodihidrofluoresceína DCHF-DA, o potencial antioxidante redutor férrico e o teste de TBARS (espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico). Os embriões foram resfriados e avaliados taxa de sobrevivência e eclosão. Neste estudo a melatonina demonstrou resultados positivos como antioxidante para o sêmen criopreservado de zebrafish nas concentrações de 10-11 e 10-9, reduzindo danos de EROs e danos ao DNA. Porém, para o tecido ovariano e embriões de zebrafish não houve efeito antioxidante significativo.

The objective of this study was to evaluate the influence of the antioxidant potential of methoxy-N-acetyltryptamine, also known as melatonin, on cryopreserved zebrafish semen and ovarian tissue fragments, as well as on cooled zebrafish embryos. Zebrafish semen was cryopreserved with different concentrations of melatonin (0 M, 10-11 M, 10-9 M, and 10-7 M), and biochemical tests were subsequently performed on these cryopreserved tissues. Ovarian tissue was cryopreserved with different concentrations of melatonin (0 M, 10-11 M, 10-9 M, and 10-7 M), and biochemical tests were also performed on these cryopreserved tissues. The influence of melatonin concentrations of 0 M, 10-11 M, 10-9 M, and 10-7 M on the survival and hatching rates of cooled zebrafish embryos was also evaluated. For semen, the following biochemical tests were conducted: protein quantification, lipid peroxidation, evaluation of Superoxide Dismutase (SOD) enzyme activity, evaluation of Catalase (CAT) enzyme activity, evaluation of Glutathione S-transferase (GST) activity, as well as the Comet Assay. For ovarian tissue, the membrane integrity test and tests for oxidative stress were conducted: diacetate of Dichlorodihydrofluorescein (DCHF-DA) assay, ferric reducing antioxidant potential, and the TBARS (thiobarbituric acid-reactive species) test. The embryos were cooled, and survival and hatching rates were evaluated. In this study, melatonin showed positive results as an antioxidant for cryopreserved zebrafish semen at concentrations of 10^-11 M and 10^-9 M, reducing ROS damage and DNA damage. However, no significant antioxidant effect was observed for zebrafish ovarian tissue and embryos.