Evaluation of ELISA procedures to detect von Willebrand Factor with monoclonal antibodies

Abstract

(Evaluation of ELISA procedures to detect von Willebrand Factor with monoclonal antibodies). The von Wille-brand Factor is a multimeric glycoprotein responsible for the promotion of platelet adhesion and aggregation at sites of vascular injury, and for FVIII stabilization. Abnormalities on this protein are responsible for diverse types of von Willebrand Disease. In the present study, monoclonal antibodies against human von Willebrand Factor were developed as a means to improve von Willebrand Disease research and diagnosis. Monoclonal antibodies were tested for their ability to bind to purified and plasmatic von Willebrand Factor. Monoclonal antibodies vW22 and vW23 were found to bind only purified von Willebrand Factor, and monoclonal antibodies vW18 and vW21 were found to bind purified and plasmatic von Willebrand Factor. Antibodies vW18 and vW21 were used to perform a sandwich-enzyme-linked immunosorbent assay to detect and quantify von Willebrand Factor concentration in plasma samples from 143 coagulopathy patients and 12 healthy blood donors. The assay showed high perfor-mance, with strong correlation and agreement in results, when compared to electroimmunoassay (Rs = 0.843 and K = 0.691 with p<0.001) and a commercial ELISA (Rs = 0.930 and K = 0.819 with p<0.001). S-ELISA proved to be a useful tool in vWF quantification tests in Brazilian specialized laboratories as an alternative to imported tests.

(Avaliação de procedimentos ELISA para detectar o Fator von Willebrand com anticorpos monoclonais). O Fator von Willebrand é uma glicoproteína multimérica responsável pela promoção da adesão e agregação de plaquetas nos locais de lesão vascular e pela estabilização do FVIII. Anormalidades na função ou estrutura desta proteína são responsáveis por diversos tipos de doença de von Willebrand. Para auxiliar na pesquisa e diagnóstico da doença de von Willebrand, este estudo desen-volveu anticorpos monoclonais contra fator von Willebrand humano. Os anticorpos monoclonais foram testados quanto à sua capacidade de se ligar ao fator von Willebrand purificado e plasmático. Os anticorpos monoclonais vW22 e vW23 ligaram-se somente ao fator von Willebrand purificado, e anticorpos monoclonais vW18 e vW21 ligaram-se tanto ao fator von Willebrand purificado como ao plasmático. Anticorpos vW18 e vW21 foram utilizados no desenvolvimento de um ELISA sandwich para detectar e quantificar a concentração de fator von Willebrand no plasma em uma amostra de 143 pacientes com coagulopatias e 12 doadores de sangue saudáveis. O teste mostrou alto desempenho, com forte correlação e concordância quando comparado com uma imunoeletrofose (Rs = 0,843 e K = 0,691 p <0,001) e um ELISA comercial (Rs = 0,930 e K = 0,819 p <0,001). O ELISA-S desenvolvido no presente trabalho mostrou um bom desempenho para ser usado como teste de quantificação vWF em laboratórios especializados no Brasil como alternativa para testes importados.