Vitrificação de espermatogônias de lambari (Hyphessobrycon Boulengeri) em cápsulas biodegradáveis

Abstract

O lambari (Hyphessobrycon boulengeri) é uma espécie nativa do estado do Rio Grande do Sul, de pequeno tamanho e fácil manejo tornando-se em um peixe para ser utilizado na pesca esportiva, consumo e pesquisas contribuindo a ser uma espécie de interesse comercial. A presente pesquisa origina-se pela necessidade de preservar mediante a técnica da vitrificação o tecido testicular, comparando a eficiência de recipientes biodegradáveis e (cápsula de gelatina, cápsula de hipromelose) dos convencionais (criotubo). No experimento 1 constava em avaliar e selecionar o melhor protocolo de vitrificação para tecido testicular testado em diferentes quantidades de Solução de equilíbrio (ES) e solução de vitrificação (VS), sendo avaliado a integridade de membrana das espermatogônias pela coloração com azul de tripan. O protocolo três (P3) (2 M DMSO + 2.5 M etileno glicol) mostrou maior viabilidade celular (25.42± 4.19%) e com este se desenvolveu o segundo experimento. No experimento 2 foram analisadas a concentração e viabilidade celular, atividade mitocondrial por ensaio MTT e estresse oxidativo por TBARS e FRAP. Os resultados indicaram que os criotubos e as cápsulas de gelatina mantem similar concentração celular a diferença das cápsulas de hipromelose. A atividade mitocondrial não foi afetada entre os tratamentos após o aquecimento. Além, criotubos e cápsulas de hipromelose mostraram maior capacidade anti-oxidativa em comparação com as cápsulas de gelatina. Os resultados obtidos indicam que os recipientes biodegradáveis têm a capacidade de criopreservar espermatogônias após a vitrificação e aquecimento, além podem ter um rol importante como recipientes de vitrificação convertendo-se em uma alternativa económica e amigável com o ambiente.

The lambari (Hyphessobrycon boulengeri) is a fish native species to the state of Rio Grande do Sul, small in size and easy to handle, making it a fish to be used in sports fishing, consumption and research, contributing to being a species of commercial interest. The present research originates from the need to preserve testicular tissue using the vitrification technique, comparing the efficiency of biodegradable containers (gelatin capsule, hypromellose capsule) with conventional ones (cryotube). Experiment 1 consisted of evaluating and selecting the best vitrification protocol for testicular tissue tested in different amounts of Equilibrium Solution (ES) and Vitrification Solution (VS), and membrane integrity of spermatogonia cells was evaluated by trypan blue staining. Protocol three (P3) (2 M Me2SO + 2.5 M ethylene glycol) showed greater cell viability (25.42± 4.19%) and with this the second experiment was developed. In experiment 2 cell concentration and viability, mitochondrial activity by MTT assay and oxidative stress by TBARS and FRAP were analyzed. The results indicated that cryotubes and gelatin capsules maintain similar cell concentrations compared to hypromellose capsules. Mitochondrial activity was not affected between treatments after warming. Furthermore, cryotubes and hypromellose capsules showed greater antioxidative capacity compared to gelatin capsules. The results obtained indicate that biodegradable containers have the ability to cryopreserve spermatogonia after vitrification and heating, and can also play an important role as vitrification containers becoming an economical and friendly alternative to the environment.