Ferramentas quimiométricas aplicadas à micologia : fatores que impactam na inibição de espécies de Candidas

Abstract

As infecções ocasionadas pelas espécies do gênero Candida acometem anualmente milhares de indivíduos, principalmente, imunocomprometidos sendo considerados patógenos oportunistas, tornando-se um problema de saúde pública. Embora as diversas técnicas microbiológicas de cultura in vitro de fungos sejam bem desenvolvidas e padronizadas. Existem muitas variáveis que influenciam o crescimento destes microrganismos. Dessa forma, analisou-se a interferência da temperatura de incubação, adição de glicose e diferentes níveis de pH sobre leveduras do gênero Candida. Porquanto essas variáveis, não só influenciam no crescimento das leveduras como também suas mudanças fenotípicas, além disso, interferem na determinação da concentração inibitória mínima (CIM) dos antifúngicos podendo modificar diretamente na terapia clínica. Para isso foram realizados testes das contribuições térmicas sobre diferentes espécies de Candidas em uma estufa de incubação sob temperatura controlada. A fim de que sejam respondidos quais os impactos acerca de diferentes pontos de incubação na estufa e suas modificações sobre o teste susceptibilidade por microdiluição. Outro panorama avaliado foi a comparação entre checkerboard e um desenho fatorial completo com as variáveis pH e glicose. Os resultados obtidos demonstraram significância estatística (p<0,01) quanto à modificação de temperatura, quando diferentes posições são assumidas dentro da mesma estufa pelos termômetros. Assim, foram obtidos CIM díspares nessas mesmas posições registradas pelos termômetros. Outro achado mostra que a redução do pH (4) e adição de glicose (2%) ao meio de crescimento (RPMI 1640) tornam os isolados de Candida spp. menos suscetíveis ao fluconazol quando comparado as condições preconizadas pela metodologia padrão (CLSI). Adicionalmente, caracteres fenotípicos que não são levados em consideração no teste de susceptibilidade, parecem ser importantes para o estabelecimento de uma terapia clínica eficaz.

Infections caused by species of the genus Candida afflict thousands of individuals, mainly immunocompromised individuals, and are considered opportunistic pathogens, becoming a public health problem. Although the various microbiological techniques of in vitro culture of fungi are well developed and standardized. There are many variables that influence the growth of these microorganisms. In this way, the interference of incubation temperature, glucose addition and different pH levels on yeasts of the genus Candida was analyzed. Because these variables not only influence the growth of yeasts but also their phenotypic changes, in addition, they interfere in the determination of the minimum inhibitory concentration (MIC) of the antifungals and can modify directly in the clinical therapy. For this, tests of the thermal contributions on different Candida species were carried out in incubator under controlled temperature. In order to answer the impacts on different incubation points in the incubator and their modifications on the microdilution susceptibility test. Another panorama evaluated was the comparison between checkerboard and a complete factorial design with the variables pH and glucose. The results obtained showed statistical significance (p <0.01) for the temperature change, when different positions are assumed inside the same oven by the thermometers. Thus, different MICs were obtained in these same positions recorded by the thermometers. Another finding shows that the reduction of pH (4) and addition of glucose (2%) to the growth medium (RPMI 1640) make the Candida spp. less susceptible to fluconazole when compared to the conditions recommended by the standard methodology (CLSI). In addition, phenotypic characters that are not taken into account in the susceptibility test appear to be important for the establishment of effective clinical therapy.Key words: Candida, pH, temperature, susceptibility, experimental design, minimal inhibitory concentration.