Morte induzida por LY294002 para o estudo da vulnerabilidade seletiva em culturas organotípicas de hipocampo de rato

Abstract

A cultura organotípica de hipocampo tem sido usada como modelo para o estudo de mecanismos de morte celular in vitro. Adotamos este modelo na tentativa de estudar proteínas envolvidas na vulnerabilidade seletiva das regiões CA1 e DG do hipocampo. Para a investigação do envolvimento da via da PI3K na vulnerabilidade as culturas foram tratadas com LY294002, inibidor da via, nas doses 10μM e 50μM e a resposta foi monitorada com iodeto de propídeo, um corante de exclusão de células sadias visualizado em microscopia de fluorescência, e ensaio da atividade das caspases 3 e 7. Após administração de LY294002 constatamos, para ambas as doses testadas, um grande aumento na morte celular da estrutura em cultivo, com uma intensidade dependente da dose administrada. O DG mostrou-se mais sensível que o CA1 nas primeiras horas de observação. Na dose de 50μM houve um considerável aumento na atividade da caspase 3 e 7 nas regiões estudadas, principalmente no DG. O inibidor de caspase Z-DEVD-FMK reduziu a atividade da caspase 3 na dose de 50μM de LY294002, mas não foi capaz de inibir a morte celular de uma forma geral. Esses resultados sugerem uma grande importância da via da PI3K nessas regiões, pois a sua inibição induz morte por apoptose, aparentemente também ocorrendo uma grande morte por necrose. A região do DG mostrou-se mais sensível que a região do CA1, sugerindo uma maior necessidade da via da PI3K nesse local, possivelmente contribuindo para a maior resistência do DG a outros insultos como, por exemplo, a POG.