Desenvolvimento e aplicação de método bioanalítico para detecção de biomarcadores do consumo de cocaína e crack em amostras de colostro e mecônio através de LC-MS

Abstract

O abuso de drogas durante a gestação e/ou amamentação é uma preocupação constante das equipes de saúde, pois pode causar inúmeros efeitos adversos aos recém-nascidos. O desenvolvimento de métodos analíticos para detectar drogas de abuso em amostras de colostro (primeiro estágio do leite materno) e mecônio (primeiras fezes do recém-nascido) tem grande relevância, pois permite o monitoramento e o correto tratamento dos bebês expostos e também das usuárias. Método de cromatografia líquida acoplado ao espectrômetro de massas (LC-MS) foi desenvolvido e validado para a determinação de biomarcadores do uso de cloridrato de cocaína e de sua forma fumada “crack” (cocaína base) em amostras de colostro e mecônio. A cocaína (COC) e seu metabólito benzoilecgonina (BZE), os produtos de pirólise éster metilanidroecgonina (AEME) e anidroecgonina (AEC) foram analisados após um simples procedimento de precipitação de proteínas e centrifugação utilizando atropina (ATP) como padrão interno (PI). Aplicando estudo de quimiometria, todos os picos foram separados em condição isocrática por 12 minutos através de uma coluna para compostos polares Kinetex HILIC a 30 °C. Um íon foi utilizado para a quantificação e três íons para a confirmação de cada analito. O método foi linear para todos os analitos no intervalo de concentração de 5 – 300 ng/mL com coeficientes de correlação (r) entre 0,9983 – 0,9996 para as amostras de colostro e no intervalo de 15 – 500 ng/mg com r entre 0,9971 – 0,9986 para as amostras de mecônio. O limite inferior de quantificação (LIQ) foi de 5 ng/mL para o colostro e 15 ng/mg para o mecônio, com parâmetros de validação dentro do preconizado. O efeito matriz foi avaliado e apresentou resultados adequados, demonstrando que ambos os procedimentos de limpeza das amostras são rápidos e confiáveis, exigindo pequenas quantidades de solvente orgânico. O método por LC- MS é mais rápido e barato quando comparado com outros disponíveis na literatura e também foi aplicado com sucesso para avaliar amostras reais de colostro e mecônio.

Development and application of bioanalytical method for detection of cocaine and crack use biomarkers in colostrum and meconium samples by LC-MS. Drug abuse during pregnancy and/or breastfeeding is an ongoing concern of health professionals, because it can cause several adverse effects to newborns. The development of analytical methods to detect drugs of abuse in colostrum (first stage of breast milk) and meconium (first stool of the new born) has great relevance, because it allows the monitoring and the appropriate treatment of the exposed newborns and mothers. A liquid chromatography coupled to mass spectrometry (LC- MS) method was developed and validated for the determination of cocaine hydrochloride and its smoked form “crack” (cocaine base) biomarkers in samples of colostrum and meconium. Cocaine (COC) and its metabolite benzoylecgonine (BZE), its pyrolytic products anhydroecgonine methyl ester (AEME) and anhydroecgonine (AEC), were analyzed after a simple protein precipitation and centrifugation procedure using atropine (ATP) as internal standard (IS). Applying a chemometric approach study, all the peaks were separated at isocratic conditions in an 12 minutes run using a column for polar compounds Kinetex HILIC at 30 °C. One ion was used for quantification and three ions for confirmation of each analyte. The method was linear for all analytes within the concentration range of 5 – 300 ng/mL with correlation coefficients (r) between 0.9983 – 0.9996 for colostrum samples and within 15 – 500 ng/mg with r between 0.9971 – 0.9986 for meconium samples. Lower limit of quantification (LLOQ) was 5 ng/mL for colostrum and 15 ng/mg for meconium, with validation parameters within recommended values. Matrix effect was evaluated and showed adequate results, demonstrating that both sample cleaning procedures are fast and reliable, requiring small amounts of organic solvent. The LC-MS method is faster and cheaper compared to others available in the literature and it has also been successfully applied to assess real samples of colostrum and meconium.