Atividade anti-candida de frações bioativas de uncaria tomentosa (Willd) DC. e sinergismo com fluconazol e terbinafina

Abstract

Infecções fúngicas resistentes mostram uma crescente prevalência nas últimas décadas, levando à procura fármacos mais eficazes, incluindo produtos naturais. Uncaria tomentosa (unha-de-gato) possui uma complexa composição de polifenois, alcaloides e triterpenos, que tem sido pouco explorada nesse contexto. Assim, o presente trabalho teve por objetivo a avaliação da atividade anti-Candida e de mecanismos de ação eventualmente envolvidos. Para essa finalidade seis isolados de Candida não-albicans foram selecionados pelo seu histórico de resistência. Amostras de cascas secas foram extraídas com EtOH a 50%, seguido de concentração e armazenagem a 10 °C durante 24 h. A porção solúvel foi separada e fracionada em fase polimérica sólida, originando três frações ricas em polifenois, alcaloides e triterpenos. A porção insolúvel em água (Water-insoluble Fraction - WIF) foi retomada no mesmo solvente etanólico, repetindo-se o processo anterior. Os testes exploratórios de susceptibilidade antifúngica revelaram atividade moderada para todas as frações solúveis e uma atividade superior para a fração insolúvel. A análise por CLAE e o teste da Vanilina ácida indicaram a predominância de polifenóis de alta massa molecular (70,8%) em WIF. A associação da fração WIF com terbinafina e fluconazol mostrou uma clara atividade sinérgica, com alterações morfológicas evidenciadas por MEV e pelo teste com sorbitol. Testes utilizando verapamil (inibidor da bomba de efluxo) excluíram a participação deste mecanismo. Pelo contrário, os resultados das análises por DSC e FT-IR apontam para um mecanismo externo à célula. O conjunto das observações sugere um mecanismo de ação sobre a parede celular, provavelmente vinculado a interações intermoleculares entre a fração e os antifúngicos testados.

Resistant fungal infections show an increasing prevalence in recent decades, demanding therefore more effective new drugs, including herbal products. Uncaria tomentosa (cat's claw) has a complex polyphenols, alkaloids and triterpene composition, which has been little explored in that sense. Thus, the present study aimed at evaluation of the anti-Candida activity and related mechanisms of action. For this purpose six isolates of non-albicans Candida species were selected owing their history of antifungal resistance. Samples of the dried bark were extracted with 50% EtOH, followed by concentration and storage (10 °C for 24 h) steps. The soluble portion was separated and fractionated on a solid polymer phase, yielding three enriched fractions of polyphenols, alkaloids and triterpenes. The water-insoluble portion (WIF) was dissolved again using the same ethanolic solvent, and submitted to the procedure described above. Screening antifungal susceptibility testing revealed just a moderate activity for all soluble fractions, and a superior one respecting the WIF fraction. HPLC analysis and vanillin acid assay of WIF indicated the polyphenol prevalence (70.8 %). The association of fraction WIF with terbinafine and fluconazole showed a clear synergic activity with morphological changing, as observed by MEV and the wall integrity test with sorbitol. Tests using verapamil (inhibitor of efflux pump) excluded the participation of this mechanism in the synergic response. Moreover, the results from both FT-IR and DSC analysis of WIF, alone and combined with terbinafine and fluconazole, suggest a mechanism acting outside the cell membrane. The results all together hint a mechanism of action probably linked to wall cell, probably due to specific intermolecular interactions between the fraction WIF and both antifungals matter of this study.