Associação de cumestrol com hidroxipropil-β-ciclodextrina : influência do método de complexação sobre a liberação a partir de bases hidrofílicas e avaliação da atividade cicatrizante in vivo

Abstract

O cumestrol é um flavonoide pertencente à classe dos coumestanos e é encontrado principalmente em plantas como a alfafa, trevo e soja. Classificado como um fitoestrógeno, devido sua afinidade pelos receptores estrogênicos, ao cumestrol também são atribuídas propriedades antioxidante e antiinflamatória. Caracterizando-se como uma molécula com reduzida hidrossolubilidade, a sua associação com ciclodextrina representa uma interessante estratégia para superar esta limitação biofarmacêutica. No presente trabalho, realizou-se diferentes métodos de associação de cumestrol com hidroxipropil-β- ciclodextrina (HPβCD) : método de micro-ondas seguido de liofilização, organo- aquoso seguido de spray drying e simples mistura. As associações obtidas foram caracterizadas, incorporadas em diferentes hidrogeis hidrofílicos (quitosana e hipromelose - HPMC) e a liberação do cumestrol foi avaliada, em célula de difusão do tipo Franz. A observação, em estudos preliminares realizados in vitro, de que o cumestrol associado à HPβCD promovia a proliferação de fibroblastos motivou o estudo de avaliação de suas propriedades cicatriciais em modelo animal, de avaliação da atividade cicatrizante, numa etapa subseqüente do presente trabalho. Os resultados revelaram que a associação cumestrol:HPβCD obtida pelo método de spray drying incorporado em hidrogel de HPMC (HPMC+COU:CD-SD) apresentou a melhor desenvoltura no perfil de liberação in vitro. Nos ensaios in vivo os resultados observados a partir da avaliação da contração da ferida excisada, da análise da enzima mieloperoxidase (MPO) e da análise histológica ao longo de 12 dias de tratamento indicaram que o tratamento realizado com HPMC+COU:CD-SD apresentou resultados interessantes frente ao processo de cicatrização, sendo semelhante em eficácia, se comparado com o controle positivo (Dersani®), mas mais eficiente que o mesmo, uma vez que o fechamento de 50% da ferida foi alcançado em menos tempo. Além disso, as análises histológicas indicaram que ambos tratamentos apresentaram uma organização adequada do tecido após 12 dias. Este conjunto de resultados inéditos evidencia o uso do cumestrol em preparações destinadas à promoção da cicatrização.

9 ABSTRACT The Coumestrol is a flavonoid which belongs to the coumestans class and is found mainly in plants such as alfalfa, clover and soybeans. Classified as a phytoestrogen, because of its affinity to the estrogen receptor, coumestrol is also meant to have antioxidant and anti-inflammatory properties. Characterized as a molecule with reduced water solubility, its association with cyclodextrin is an interesting strategy to overcome this biopharmaceutical limitation. In the present work, different methods of coumestrol association with hydroxypropyl-β- cyclodextrin (HPβCD) were performed: microwave method followed by freeze- drying, organo-aqueous followed by spray drying and simple mixing. The obtained combinations were characterized, incorporated in different hydrophilic hydrogels (chitosan and hypromellose - HPMC) and the release of coumestrol was evaluated in Franz type diffusion cell. The observation, in preliminary studies in vitro, that coumestrol associated to HPβCD promoted the proliferation of fibroblasts led to the evaluation study of its wound healing properties in animal models, of the evaluation of healing activity, in a subsequent stage of this work. The results showed that the association coumestrol:HPβCD obtained by the spray drying method incorporated into hydrogel HPMC (HPMC+COU:CD-SD) showed the best performance in vitro release profile. In in vivo assays the observed results from the assessment of the contraction of the excised wound, the analysis of myeloperoxidase enzyme (MPO) and histological analysis over 12 days of treatment indicated that the treatment carried out with HPMC+COU:CD-SD had interesting results across the healing process, being similar in efficacy if compared to the positive control (Dersani®), but more efficient than the same, once the closure of 50 % of the wound was achieved in less time. Furthermore, histological analyzes showed that both treatments presented a proper organization of the tissue after 12 days. This set of new results showcases the use of coumestrol in preparations intended for the promotion of healing.