Inibição dos receptores de fatores de crescimento diminuem a progressão tumoral de Sarcoma de Ewing in vitro e in vivo

Abstract

O sarcoma de Ewing (SE) é um tumor pediátrico, o segundo sarcoma ósseo mais comum em crianças e adolescentes. O tratamento do SE, na maioria das vezes, é a realização de quimioterapia sistêmica associada à cirurgia ou radioterapia, porém os tratamentos atuais tem se mostrado ineficientes, sendo necessária a busca por novas terapias e melhor entendimento a nível molecular do tumor. Deste modo, estudos recentes têm avaliado a presença de receptores de tropomiosina quinase (Trks) em diversos tumores e foi visto que pacientes com SE possuem os receptores de neurotrofinas TrkA, TrkB e TrkC. Os Trks são estudados como reguladores chave de todos os aspectos da neoplasia, incluindo proliferação, invasão, angiogênese e metástase, assim como o receptor do fator de crescimento semelhante à insulina tipo 1 (IGF1R) que tem sido amplamente estudado em SE como alvo terapêutico. Estudos in vitro do nosso grupo de pesquisa avaliaram que neurotrofinas e seus receptores são expressos em SE e a inibição dos receptores através do tratamento com K252a diminuiu a proliferação celular. O presente estudo avaliou o papel da inibição combinada de antagonistas de TrKs e IGF-1R in vitro, bem como a padronização de um modelo in vivo de SE. A avaliação in vivo foi realizada a partir da indução tumoral de linhagem celular de SE e o tratamento foi avaliado a partir do volume tumoral e análise histológica com a técnica de imunohistoquímica; in vitro o índice de combinação entre as drogas foi analisado através do método de ZIP (Zero Interaction Potency) e a técnica de reação em cadeia da polimerase em tempo real de transcrição reversa foi realizada para verificar os níveis de RNA mensageiro. In vivo o tratamento demonstrou eficácia na redução da massa tumoral, semelhante aos resultados previamente encontrados in vitro e o tratamento combinado demonstrou maior potencial do que os tratamentos separados, apresentando sinergia e em concordância com diversos estudos pré-clínicos e clínicos com SE que concluem que tratamentos com mais de um agente são, de fato, mais promissores e eficazes.

Ewing's sarcoma (ES) is a pediatric tumor, the second most common bone sarcoma in children and adolescents. The treatment of ES, in most cases, is systemic chemotherapy associated with surgery or radiotherapy, but current treatments have been shown to be inefficient, requiring the search for new therapies and a better understanding of the tumor molecular level. Thus, recent studies have evaluated the presence of tropomyosin kinase receptors (Trks) in several tumors and it has been seen that patients with ES have the neurotrophin receptors TrkA, TrkB and TrkC. Trks are studied as key regulators of all aspects of neoplasia, including proliferation, invasion, angiogenesis and metastasis, as well as the insulin-like growth factor receptor type 1 (IGF1R) which has been extensively studied in ES as a therapeutic target. In vitro studies by our research group evaluated that neurotrophins and their receptors are expressed in ES and the inhibition of receptors through K252a treatment decreased cell proliferation. The present study evaluated the role of combined inhibition of TrKs and IGF-1R antagonists in vitro, as well as the standardization of an in vivo model of ES. The in vivo evaluation was performed from the tumor induction of the ES cell line and the treatment was evaluated from the tumor volume and histological analysis with the immunohistochemistry technique; in vitro the combination index between the drugs was analyzed using the ZIP method (Zero Interaction Potency) and the real-time reverse transcription polymerase chain reaction technique was performed to verify the levels of messenger RNA. In vivo, the treatment demonstrated efficacy in reducing tumor mass, similar to the results previously found in vitro and the combined treatment showed greater potential than the separate treatments, showing synergy and in agreement with several pre-clinical and clinical studies with ES that conclude that treatments with more than one agent are, in fact, more promising and effective.