Desenvolvimento e validação de métodos analíticos visando a determinação quantitativa do marcador químico verbascosídeo em Plantago australis Lam. e Plantago major L. (Plantaginaceae)

Abstract

As espécies Plantago australis Lam. e Plantago major L., conhecidas popularmente como tansagem, têm sido empregas na medicina popular como agentes anti-inflamatórios, antibacterianos e cicatrizantes, entre outros. Várias destas atividades foram objeto de ensaios farmacológicos. Assim, este estudo tem como objetivo desenvolver e validar métodos analíticos de acordo com a RDC nº 166/2017, identificando marcadores químicos para estabelecer os critérios mínimos de qualidade para o uso de extratos das folhas de P. australis (PA) e P. major (PM) (Plantaginaceae). Por análises cromatográficas prévias e dados da literatura foi determinado como marcador químico para ambas as espécies o feniletanoide verbascosídeo. Os resultados do desenvolvimento do método extrativo para análise de verbascosídeo de PA e PM demonstraram que o melhor método de extração foi o refluxo e o metanol como melhor solvente extrator. A otimização de extração dessas espécies por CLUE/UV foi realizada por Desenho Fatorial Fracionado, seguido de planejamento via Desenho de Composto Central para PA e planejamento via Box-Behnken para PM. Para folhas de PA a melhor resposta obtida foi quando da utilização de material cominuído com tamanho de partículas de 180 μm, 20 min de extração, relação massa: volume (m/v) de 1:62,5, metanol 66% e sem renovação de solvente. Para PM a melhor resposta foi obtida com o mesmo tamanho de partículas, porém com tempo de extração de 60 min, relação massa: volume (m/v) de 1:60, metanol 89% e sem renovação de solvente. A determinação de perda por dessecação mostrou os teores de umidade nas folhas de PA foram de 6,99 a 9,37% e de PM foram de 6,9 a 8,81%. Os perfis cromatográficos dos extratos metanólicos das amostras de PA e PM obtidos por CCDAE mostram o marcador químico verbascosídeo com Rf médio de 0,77. Os parâmetros da validação do método de quantificação de verbascosídeo para PA e PM demonstraram seletividade, linearidade, precisão, exatidão, robustez e adequabilidade do sistema satisfatório.

The species Plantago australis Lam. and Plantago major L., popularly known as tansagem, have been used in folk medicine as anti-inflammatory, antibacterial and healing agents, among others. Several of these activities were the subject of pharmacological tests. Thus, this study aims to develop and validate analytical methods in accordance with RDC nº 166/2017, identifying chemical markers to establish the minimum quality criteria for the use of extracts from the leaves of P. australis (PA) and P. major (PM) (Plantaginaceae). By previous chromatographic analyzes and literature data, the phenylethanoid verbascoside was determined as a chemical marker for both species. The results of the development of the extractive method for the analysis of verbascoside from PA and PM showed that the best extraction method was reflux and methanol as the best extracting solvent. The extraction optimization of these species by UPLC/UV was performed by Fractional Factorial Design, followed by planning via Central Composite Design for PA and planning via Box-Behnken for PM. For PA sheets, the best response was when using comminuted material with a particle size of 180 μm, 20 min of extraction, mass: volume (m/v) ratio of 1:62.5, methanol 66% and no renewal of solvent. For PM, the best response was obtained with the same particle size, but with an extraction time of 60 min, mass: volume (m/v) ratio of 1:60, methanol 89% and no solvent renewal. The determination of loss by desiccation showed the moisture contents in the PA leaves were from 6.99 to 9.37% and of PM were from 6.9 to 8.81%. The chromatographic profiles of the methanolic extracts of the PA and PM samples obtained by HPTLC show the chemical marker verbascoside with an average Rf of 0.77. The parameters of the validation of the verbascoside quantification method for PA and PM demonstrated selectivity, linearity, precision, accuracy, robustness and suitability of the satisfactory system.