Desenvolvimento de método analítico para análise de drogas de abuso utilizando a técnica de dried spot para fluido oral

Abstract

A técnica de dried matrix spots (DMS) consiste em um procedimento de coleta de matrizes biológicas diretamente em papel filtro com especificações padronizadas para posterior análise das substâncias de interesse. Diante das vantagens descritas para esta técnica, novas metodologias vêm sendo desenvolvidas para aplicação em diversas áreas, dentre elas na toxicologia. Neste contexto, é de interesse o desenvolvimento de uma metodologia que utilize o fluido oral (FO) como matriz biológica, investigando a viabilidade da técnica de dried oral fluid spots (DOFS) na análise de drogas de abuso. O objetivo deste trabalho consistiu em validar método analítico quantitativo por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (CLAE-EM) para análise simultânea de cocaína, 3,4-metilenodioximetanfetamina (MDMA), anfetamina, benzoilecgonina (BZE) e cocaetileno utilizando DOFS. O FO foi aplicado em papel filtro Whatman® 903 e o tempo necessário para completa secagem foi estudado. Os solventes utilizados no processo de extração foram definidos através de abordagem quimiométrica, utilizando desenho simplex centroide para otimização. A curva de calibração foi definida cobrindo o intervalo linear de 40-500 ng/mL. Os parâmetros de validação avaliados foram: linearidade, precisão, exatidão, seletividade, efeito residual, efeitos de matriz e estabilidade. Além disso, foram investigadas a homogeneidade e a influência do volume de amostra aplicado no spot. O tempo de secagem ideal foi definido em 2,5 horas. O desenho quimiométrico permitiu a otimização da escolha dos solventes para a extração líquida, sendo definido o uso de acetonitrila:acetato de amônio:metanol (55:35:10 v/v) para a extração. A homocedasticidade da curva foi confirmada pelo teste de Cochran e o modelo linear proposto foi considerado adequado. Não foram observados interferentes na avaliação de seletividade e efeito residual. A avaliação da homogeneidade do spot apresentou menos de 15% de desvio do valor nominal de concentração e o volume de amostra aplicado de até 100 μL não prejudicou a exatidão, confirmando a homogênea difusão da amostra no papel. A realização deste trabalho abre precedentes ao demonstrar a viabilidade da aplicação de DOFS para a quantificação de drogas de abuso e oportuniza o surgimento de novos estudos que ampliem a utilização desta técnica em outras matrizes biológicas e novos contextos de aplicação.

Dried matrix spots (DMS) consist of a sampling technique which comprises the collection of a small volume of a biological fluid onto a specific filter paper for further analysis. Due to the several advantages of the technique, DMS started to be employed for different purposes, with an increase of applications in toxicology in the last decade. In this context, it is of interest the development of a methodology using oral fluid (OF) to investigate the feasibility of dried oral fluid spots (DOFS) in drugs of abuse analysis. The aim of this work was to validate a liquid chromatography–mass spectrometry method using DOFS for the simultaneous quantification of cocaine, benzoylecgonine, cocaethylene, amphetamine, and 3,4-methylenedioxymethamphetamine. The oral fluid was applied to a Whatman® 903 grade paper and complete drying time was studied. The extraction procedure was optimized by chemometric approach using simplex centroid design. Calibration curves covered a linear concentration range of 40–500 ng/mL. Validation parameters of linearity, precision, accuracy, selectivity, carryover, matrix effects, and stability were evaluated. Besides, spot homogeneity and the influence of spot volume were also studied. The ideal drying time was set at 2.5 hours. The chemometric design allowed the optimization of liquid extraction, being defined a mixture of acetonitrile:ammonium acetate:methanol (55:35:10 v/v) as the solvent extraction. Homoscedasticity of the calibration curve was confirmed by Cochran’s test and the proposed linear model was considered adequate. No interferences were observed in the evaluation of carryover and selectivity. Spot homogeneity was considered satisfactory, with less than 15% of deviation from nominal concentration. Spot volume did not influence accuracy when less than 100 μL of the sample was applied onto the spot, confirming the homogeneous diffusion of the sample on the paper. The validation of the proposed method demonstrates the feasibility of DOFS application and set precedents for new studies that expand the use of this technique in other biological matrices and new application contexts.